細(xì)胞端粒酶活性分析

細(xì)胞端粒酶活性分析
端粒酶活性分析簡(jiǎn)介
       端粒是真核細(xì)胞染色體末端的一段特殊序列，由上千個(gè)6堿基重復(fù)序列(TTAGGG)組成。在體細(xì)胞中，隨著細(xì)胞的分裂，端粒長(zhǎng)度會(huì)變短。端粒酶是基本的核蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶，在細(xì)胞染色體復(fù)制過(guò)程中，能夠以自身RNA為模板，在染色體3’末端合成重復(fù)序列，維持端粒的長(zhǎng)度。端粒酶的活性端粒酶在正常人體組織中的活性被抑制，但是在一些“不死細(xì)胞”如腫瘤細(xì)胞、生殖細(xì)胞中則具有很高的活性，補(bǔ)償DNA復(fù)制導(dǎo)致的端粒縮短從而維持端粒長(zhǎng)度的穩(wěn)定。因此可以假設(shè)端粒長(zhǎng)度可能起到“有絲分裂鐘”的作用，來(lái)可作為測(cè)量細(xì)胞分裂的次數(shù)的標(biāo)志，終作為細(xì)胞衰老和凋亡的信號(hào)。因此，檢測(cè)細(xì)胞中端粒酶的活性對(duì)干細(xì)胞、腫瘤生物學(xué)的研究具有很重要的意義，已有研究表明，在20多種腫瘤細(xì)胞中，80%以上可以檢測(cè)到粒酶活性。
      利用端粒酶在體外可以以其自身RNA的模板區(qū)為模板，在適宜的寡核苷酸鏈的末端添加6個(gè)堿基的重復(fù)序列的原理，1994年Kim建立了基于PCR基礎(chǔ)上的端粒重復(fù)序列擴(kuò)增法（telomeric repeat amplification protocol, TRAP）。TRAP主要原理如下：先合成一個(gè)18nt的TS做上游引物，端粒酶結(jié)合TS末端的GTT并合成AGGGTTAG，然后每經(jīng)過(guò)一次轉(zhuǎn)位合成一個(gè)ggttag的6堿基重復(fù)序列，端粒酶滅活后，加入一個(gè)24nt的CX做下游引物，經(jīng)過(guò)多次變性-退火-延伸，擴(kuò)增端粒酶延伸產(chǎn)物。然后對(duì)PCR產(chǎn)物使用不同的方法進(jìn)行檢測(cè)，從而達(dá)到檢測(cè)端粒酶活性的目的，目前主要的方法有同位素法、染色法、熒光法、ELISA法。目前大部分的端粒酶檢測(cè)試劑盒均是按照這個(gè)原理發(fā)展起來(lái)的。
 
 
檢測(cè)結(jié)果示例
通過(guò)TRAP-PCR染色法檢測(cè)鑒定樣品中端粒酶活性

檢測(cè)原理
       端粒DNA與細(xì)胞的壽命密切相關(guān)，而合成又依賴于端粒酶。正常人體細(xì)胞中不能檢測(cè)出端粒酶活性的表達(dá)，而腫瘤細(xì)胞株及大多數(shù)腫瘤組織中的端粒酶活性卻異常的高表達(dá)。TRAP－銀染法端粒酶活性檢測(cè)試劑盒是采用端粒重復(fù)序列擴(kuò)增的方法，利用銀染技術(shù)檢測(cè)端粒酶的活性。陽(yáng)性結(jié)果在凝膠電泳上顯示相隔6 bp的梯狀條帶，條帶的深淺表示端粒酶活性的大小。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程
1．細(xì)胞端粒酶或組織標(biāo)本端粒酶的提取。
2．PCR擴(kuò)增。
3．聚丙烯酰胺凝膠電泳。
4．銀染。

客戶提供
1、樣品信息：包括來(lái)源、種屬等。
2、實(shí)驗(yàn)樣本材料：新鮮細(xì)胞樣本不少于5×105 個(gè)，新鮮血漿樣本不少于500ul。
 
服務(wù)周期
2-3周（具體視樣品數(shù)而定）

項(xiàng)目交付
1、提交實(shí)驗(yàn)報(bào)告書，包括實(shí)驗(yàn)材料、試劑、儀器、實(shí)驗(yàn)過(guò)程方法、結(jié)果及分析。
2、原始數(shù)據(jù)、圖片，以及文本電子版。
 
服務(wù)流程
1、提交項(xiàng)目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)討論項(xiàng)目細(xì)節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見(jiàn)對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿意并達(dá)成一致，簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題，提供實(shí)驗(yàn)原始結(jié)果和分析結(jié)果、實(shí)驗(yàn)流程、實(shí)驗(yàn)條件等等。
 
我們的優(yōu)勢(shì)
1、提供各種實(shí)驗(yàn)材料和儀器，滿足項(xiàng)目課題實(shí)驗(yàn)需要。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實(shí)驗(yàn)室。
4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。
5、完善的服務(wù)體系，全程跟進(jìn)，確保滿意。
 
咨詢與訂購(gòu)
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