RNA提取試劑盒用于從細胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA，用LB10裂解樣品后，加入氯仿，溶液分為無色水相和粉紅色有機相，RNA在水相中；用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA），流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比，該試劑盒裂解能力強、提取量高、專一性強，應用范圍廣。
RNA提取試劑盒的提取步驟：
1、將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘，使得核酸蛋白復合物*分離。
2、可選步驟：在4°C12,000rpm離心10分鐘，取上清轉入一個新的RNasefree的離心管中。（當樣品富含蛋白質、脂肪、多糖或是細胞外物質例如肌肉、脂肪組織或植物的塊莖部分時可能需要額外的分離步驟。）
3、每1ml裂解液RL加200μl氯仿。蓋緊樣品管蓋，劇烈振蕩15秒并將其在室溫下靜置3分鐘。
4、4°C12,000rpm離心10分鐘，樣品會分成三層：下層有機相，中間層和上清水相層，RNA存在于上清水相層中。
5、將上清水相轉入新的離心管中，加入0.5倍上清水相體積的無水乙醇，立即吹打混勻。（不要吸取、沉淀物和漂浮物。漂浮物可能會黏附在槍頭的外壁，注意不能將其帶入離心管中。）
6、將混合溶液（每次小于700μl，）轉入套有吸附柱AC的離心管中，12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。
7、加500μl去蛋白液RE，12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。
8、加500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心45秒，棄掉廢液。
9、重復步驟8一次。
10、將吸附柱RA放回收集管中，13,000rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
11、取出吸附柱RA（避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液），放入新的RNase-free離心管中，在吸附膜的中間部位加50~80μlRNase-freeH2O，室溫靜置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。洗脫后的RNA可立即使用或保存在－80°C。
更新時間：2022-04-18
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