NEB限制性內(nèi)切酶介紹

NEB向研究界提供限制性內(nèi)切酶超過45年， 多年來，NEB不斷努力開發(fā)出純度最高、性能無yu倫bi的酶。

NEB限制性內(nèi)切酶分為五大類別，分別是：高保真限制性內(nèi)切酶、Homing 核酸內(nèi)切酶、Nicking核酸內(nèi)切酶、表觀遺傳學(xué)分析中的限制性內(nèi)切酶、省時(shí)有效的限制性內(nèi)切酶。

1、高保真限制性內(nèi)切酶簡介

高保真限制性內(nèi)切酶是通過交換功能性氨基酸殘基，然后篩選在廣泛條件下發(fā)揮作用的最佳突變體而設(shè)計(jì)的。無論你是將消化物放置5-15分鐘還是過夜，或者使用不同量的酶，高保真限制性內(nèi)切酶都能確保你所需的性能。

2、Homing 核酸內(nèi)切酶

Homing 核酸內(nèi)切酶是雙鏈DNA酶，具有大的不對稱識別位點(diǎn)（12-40個(gè)堿基對）和通常嵌入內(nèi)含子或內(nèi)含子的編碼序列。內(nèi)含子是由前體RNA剪接而成，而內(nèi)含子則由前體蛋白質(zhì)剪接而成。歸位核酸內(nèi)切酶是使用類似于限制性核酸內(nèi)切酶的慣例命名的，其內(nèi)含子編碼的核酸內(nèi)切酶包含前綴“I-"，而內(nèi)含子編碼核酸內(nèi)切酶則包含前綴“PI-"。

Homing 核酸內(nèi)切酶識別位點(diǎn)極其罕見。例如，在隨機(jī)序列的每7 x 10¹⁰個(gè)堿基對中，18個(gè)堿基對的識別序列將僅出現(xiàn)一次。這相當(dāng)于20個(gè)哺乳動物大小的基因組中只有一個(gè)位點(diǎn)。然而，與限制性內(nèi)切酶不同，歸巢性內(nèi)切酶在其識別序列內(nèi)容忍一些序列退化。也就是說，單堿基的改變并沒有消除裂解，而是在不同程度上降低了裂解的效率。結(jié)果，它們觀察到的序列特異性通常在10-12個(gè)堿基對的范圍內(nèi)。

3、Nicking核酸內(nèi)切酶

Nicking核酸內(nèi)切酶與限制性核酸內(nèi)切酶一樣使用簡單。由于6或7堿基缺口內(nèi)切酶產(chǎn)生的缺口不會使DNA片段化，因此通過將超螺旋質(zhì)粒轉(zhuǎn)化為開環(huán)來監(jiān)測它們的活性。或者，可以使用在相反的線束上具有足夠近的缺口位置以形成雙絞線切割的基板。

4、表觀遺傳學(xué)分析中的限制性內(nèi)切酶

許多限制性內(nèi)切酶對DNA甲基化狀態(tài)敏感。當(dāng)識別位點(diǎn)中的特定堿基被修飾時(shí)，裂解可能被阻斷或受損。NEB的科學(xué)家最近鑒定了MspJI（NEB#R0661）限制性內(nèi)切酶家族，該家族依賴于甲基化和羥甲基化才能發(fā)生切割。這些酶切除了約32個(gè)堿基對片段，這些片段包含一個(gè)位于中心的5-mC或5-mC修飾的殘基，可以提取并測序。由于這種表觀遺傳學(xué)修飾的已知位置，在下游分析之前不需要亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化。這些表觀遺傳學(xué)標(biāo)記驗(yàn)證的甲基化依賴性限制性內(nèi)切酶擴(kuò)大了繪制表觀遺傳學(xué)修飾的潛力，并簡化了DNA甲基化的研究。此外，它們?yōu)楦玫亓私?-羥甲基胞嘧啶在基因組中的作用提供了機(jī)會。

我們現(xiàn)有的幾種限制性內(nèi)切酶也可用于研究DNA的表觀遺傳學(xué)修飾，如識別相同序列但不同甲基化模式的DpnI（NEB#R0176）和DpnII（NEB#R0543）。McrBC也只在一條或兩條鏈上切割甲基化胞嘧啶的DNA。MspI（NEB#R0106）和Hpall（NEB#R0171）識別相同的序列（CCGG），但對不同的甲基化狀態(tài)敏感。Hpall只切割一個(gè)wanquan未修飾的位點(diǎn)：胞嘧啶上的任何修飾（5-mC、5-mCo或5-ghmC）都會阻斷切割。MspI會識別并切割5-hmC和5-hmC，但不會識別和切割5-ghmc。這些酶包含在EpiMark®5-mC和5-mC分析試劑盒（NEB#E3317）中。

5、省時(shí)有效的限制性內(nèi)切酶

在NEB，酶的生產(chǎn)與限制性修飾系統(tǒng)的克隆和過表達(dá)的基礎(chǔ)研究有關(guān)。這一重點(diǎn)使我們能夠提供濃度極gao的酶，為您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)提供更大的靈活性。

無論您是快速篩選大量克隆還是設(shè)置過夜消化，您都將受益于我們的高質(zhì)量酶。通常，限制性消化包括將1µl酶與1µg純化DNA在50µl的最終體積中孵育1小時(shí)。然而，為了加快篩選過程，請選擇一種符合時(shí)間節(jié)約標(biāo)準(zhǔn)的NEB酶。在推薦的反應(yīng)條件下，使用1µl的酶，這些酶將在5-15分鐘內(nèi)消化1µg的底物DNA，也可以安全地用于過夜消化。與其他供應(yīng)商不同，沒有特殊的配方、濃度變化或需要購買更昂貴的新酶系才能在5-15分鐘內(nèi)完成消化，也不必?fù)?dān)心孵化時(shí)間過長。

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