ELISA主要材料試劑有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)寫(xiě)ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么ELISA主要材料試劑有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、抗原和抗體

在ELISA實(shí)施過(guò)程中，抗原和抗體的質(zhì)量決定實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價(jià)高、親和力強(qiáng)。ELISA 所用抗原有三個(gè)來(lái)源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物組織或體液、微生物培養(yǎng)物等，一般含有多種抗原成分，需經(jīng)純化，提取出特定的抗原成分后才可應(yīng)用，因此也稱(chēng)提純抗原（purifiedantigen）。

重組抗原（recombinantantigen）和多肽抗原（peptideantigen）均為人工合成品，使用安全，而且純度高，干擾物質(zhì)少。因此雖然制備合成抗原有較高的技術(shù)難度且要求較為昂貴的儀器設(shè)備和試劑，但對(duì)那些不易得到的天然抗原，顯出其du特的優(yōu)勢(shì)。

二、Elisa板

可用作ELISA板的物質(zhì)很多，常用的是聚苯乙烯和聚氯乙烯，它們具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來(lái)的免疫活性。作為塑料，可制成各種形式。在ELISA測(cè)定過(guò)程中，它們作為載體和容器，不參與化學(xué)反應(yīng)。加之它們的價(jià)格低廉，所以被普遍采用。專(zhuān)用于ELISA測(cè)定的產(chǎn)品也稱(chēng)為ELISA板，國(guó)際通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。

三、酶和底物

ELISA實(shí)驗(yàn)中對(duì)所使用的酶也有所要求，主要為純度高、催化反應(yīng)的轉(zhuǎn)化率高、專(zhuān)一性強(qiáng)、性質(zhì)穩(wěn)定、來(lái)源豐富、價(jià)格便宜、制備成的酶標(biāo)抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，與抗體或抗原偶聯(lián)后需繼續(xù)保留著它的活性部分和催化能力。在受檢標(biāo)本中不存在與標(biāo)記酶相同的酶。此外，酶的底物應(yīng)易于制備和保存，價(jià)格低廉，有色產(chǎn)物易于測(cè)定，光吸收度高。ELISA中常用的酶為辣根過(guò)氧化酶（HRP）和從牛腸粘膜或大腸桿菌提取的堿性磷酸酶（AP）。

四、免疫吸附劑

固相的抗原或抗體稱(chēng)為免疫吸附劑。將抗原或抗體固相化的過(guò)程稱(chēng)為包被（coating）。由于載體的不同，包被的方法也不同。如以聚苯乙烯 ELISA 板為載體，通常將抗原或抗體溶于緩沖液（常用的為 pH9.6 的碳酸鹽緩沖液）中，加至ELISA 板孔中在 4℃ 過(guò)夜孵育，經(jīng)清洗后即可使用。如果包被液中的蛋白質(zhì)濃度過(guò)低，固相載體表面未能被此蛋白質(zhì)wan全覆蓋，其后加入的待測(cè)樣品中的蛋白也會(huì)吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色而導(dǎo)致本底偏高。

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