細(xì)胞凋亡檢測全指南：從原理到方法選擇｜附全流程避坑方案

標(biāo)題 ：細(xì)胞凋亡檢測全指南：從原理到方法選擇｜附全流程避坑方案  

細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果不準(zhǔn)？本文解析早期/晚期凋亡標(biāo)志物，對比流式/熒光/WB/電鏡6大技術(shù)優(yōu)劣，提供Annexin V、JC-1、Caspase-3等核心指標(biāo)操作技巧！

 一、凋亡檢測為什么總失敗？三大核心痛點(diǎn)  

1. 假陽性高：壞死細(xì)胞混雜（未區(qū)分PI+/Annexin V+）  

2. 漏檢早期凋亡：僅檢測晚期指標(biāo)（如DNA斷裂）  

3. 方法選錯：  

   > ? 組織切片用流式 → 樣本報(bào)廢  

   > ? 高通量篩選用電鏡 → 效率崩盤  

 二、6大檢測方法全解析（附黃金選擇策略）  

 1. 流式細(xì)胞術(shù)（金標(biāo)準(zhǔn)）  

> ? 適用場景：懸浮細(xì)胞、高通量分析（5min/樣本）  

 2. 熒光顯微鏡（形態(tài)學(xué)s選）  

- Hoechst 33342：染色質(zhì)固縮（藍(lán)光）  

- TUNEL：DNA斷裂標(biāo)記（綠光）  

  3. Western Blot（分子機(jī)制驗(yàn)證）  

- 必檢指標(biāo)：  

  - Cleaved Caspase-3（17/19kDa）  

  - PARP切割（89kDa）  

  - Bax/Bcl-2比值  

- 避雷：避免使用β-actin做內(nèi)參（凋亡時降解）  

 4. 電鏡（驗(yàn)證）  

- 典型特征：染色質(zhì)邊集、細(xì)胞器完整  

- 致命缺點(diǎn)：耗時＞3天，成本￥500+/樣本  

 5. 酶標(biāo)儀高通量法  

- Caspase-Glo®試劑：發(fā)光值反映酶活性  

- 適用：96/384孔板藥物篩選  

 6. 彗星電泳（DNA損傷專屬）  

- “彗星尾”長度 = DNA碎片量  

- 靈敏度：可檢單細(xì)胞損傷  

 三、方法選擇決策樹（拯救選擇困難）  

 四、凋亡檢測全流程避坑手冊  

1. 樣本制備：  

   - 禁止胰酶消化（誘發(fā)假凋亡）→ 用細(xì)胞刮收集貼壁細(xì)胞  

2. 染色時機(jī)：  

   - 藥物處理后24h內(nèi)檢測（防自發(fā)壞死干擾）  

3. 對照設(shè)置：  

五、頂級試劑盒性能對比  

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