Elisa的檢測方法有哪些？

酶聯免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。Elisa的檢測方法有哪些？讓我們一起來看看吧！常見的有直接法、間接法、競爭法基雙抗夾心法，其中直接法和競爭法應用較少，應有最多的是雙抗夾心法，讓我們一一來看看它們是如何操作的吧！一、直接法將抗原固定于ELISA班上，然后用酶標抗體直檢測抗原。相較于其他類型的ELI...

查看更多

如何利用流式進行細胞凋亡（Cell Apoptosis）分析

磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine,PS)是一種細胞膜活性物質，正常細胞中，其位于細胞膜脂質雙層內側,在細胞凋亡的早期，PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面。凋亡早期：磷脂膜(PS)外翻，但是細胞膜保持完整性，因此PI（與DNA結合）染色為陰性。AnnexinV是一種磷脂結合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，可以與凋亡早期外翻的磷脂膜(PS)結合。凋亡中晚期：磷脂膜(PS)外翻，但是細胞膜被破壞，AnnexinV和PI分別與磷脂酰絲氨酸和DNA結合。壞死細胞...

查看更多

Lipo3000細胞轉染的實驗步驟及注意事項

細胞轉染常用的轉染試劑很多，其中，Lipo3000深受廣大科研工作者的喜愛，那我們來看看Lipo3000細胞轉染的實驗步驟及注意事項吧！一、實驗前準備Lipofectamine™3000轉染試劑（ThermoFisher）、Opti-MEM（可以用無血清的培養基代替）二、實驗步驟1.接種細胞，使其在轉染時達到70–90%匯合度。注：對于HEK293，6孔板一般鋪50萬個細胞左右。對于PC9,24孔板一般鋪5-10萬個細胞。由于不同細胞，生長狀況不太一樣，需要根據情...

查看更多

影響細胞轉染效率的因素有哪些？

隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，細胞轉染已經成為研究真核細胞基因功能的常規工具。常用于研究基因功能、基因表達調控、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用非常廣泛。既然細胞轉染如此重要，那影響細胞轉染效率的因素有哪些？讓我們一起來看看吧！一、轉染試劑不同細胞系轉染效率通常不同，因此在轉染實驗前需要根據細胞特性選擇合適的轉染試劑。可以通過已發表文獻和轉染試劑提供的已成功轉染的細胞株來進行選擇。二、細胞狀態轉染前細胞活力和總體健康狀況是轉染產生變異性的重要來源。一般建...

查看更多

細胞轉染常見方法之原理、特點及實驗步驟

隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發展，細胞轉染已經成為研究真核細胞基因功能的常規工具。常用于研究基因功能、基因表達調控、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用非常廣泛。目前實驗室最為常用的細胞轉染方法有兩種：脂質體轉染法和電穿孔法，接下去分別介紹這兩種方法的原理、特點和實驗步驟。一、脂質體轉染法1.原理陽離子脂質體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內，形成DNA-脂質體復合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內吞進入細胞（見下...

查看更多