WB實驗中的磷酸酶抑制劑

一、WB實驗中的磷酸酶抑制劑的作用細胞或組織裂解時會釋放出大量內源性蛋白磷酸酶，以各種方式催化磷酸化蛋白的去磷酸化，從而影響后續的蛋白檢測。因此在提取物中適量添加外源性磷酸酶抑制劑，有利于在之后的Westernblotting、免疫共沉淀檢測磷酸化蛋白質和蛋白激酶活性測定等實驗過程中抑制磷酸化蛋白的去磷酸化，維持蛋白質的磷酸化狀態。二、WB實驗中的磷酸酶抑制劑的作用原理在細胞信號轉導中，靶蛋白會被可將磷酸基團轉移到特定位點的蛋白激酶磷酸化。這些磷酸基團在細胞裂解時會被內源性蛋...

查看更多

WB實驗中的蛋白酶抑制劑

一、WB實驗中的蛋白酶抑制劑作用WB實驗中的蛋白酶抑制劑主要是在蛋白質提取過程中，防止蛋白質水解，從而保持蛋白質的完整性。在蛋白質純化、提取過程中常受到其本身存在的水解酶的影響。在提取蛋白質的過程中細胞破碎釋放出蛋白酶，這些酶在與欲提取的蛋白質接觸時，一旦條件適宜，就會發生反應，導致蛋白質分解。二、WB實驗中的蛋白酶抑制劑的作用原理蛋白酶抑制劑（proteaseinhibitor）從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團結合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白變性的物...

查看更多

蛋白Marker的分類

在WesternBlot實驗中，蛋白Marker的作用就像是參照標尺，用于目標蛋白分子量大小的確定、蛋白分離成功與否的判斷等。因此，選擇合適的蛋白Marker，對實驗來說至關重要，那你知道蛋白Marker的分類是如何劃分的嗎？讓我們一起來看看吧！一、非預染蛋白Marker非預染蛋白Marker是幾種已知分子量并純化好的蛋白質預混液，方便不同大小的蛋白比較。其條帶在結合染料時，分子量不會改變，可準確評估SDS-PAGE的蛋白樣品分子量。非預染蛋白Marker在電泳過程中看不到，...

查看更多

細胞復蘇的小Tips

一、細胞復蘇的原理細胞復蘇的原理是基于將細胞從液氮或-80℃冰箱中快速取出并使其恢復活力的技術。遵循“快融”原則，短時間內融化胞外結晶，避免緩慢融化導致水分滲入胞內形成胞內再結晶損傷細胞，融化越快，細胞損傷越小。二、細胞復蘇的小Tips1.為防止凍存管在水浴鍋中升溫時突然爆炸，可以在放入水浴鍋前先在生物安全柜中把蓋子擰松一下然后再擰上。2.從液氮罐里拿出細胞不必急于放入水浴鍋中，因為細胞從液氮的-196℃上升到-80℃這個過程對細胞是沒有損害的，我們有足夠的時間處理。但是，一...

查看更多

免疫組化（IHC）SP法，原來如此簡單！

免疫組化，是應用免疫學基本原理-抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質)，對其進行定位、定性及相對定量的研究，稱為免疫組織化學技術或免疫細胞化學技術。一、SP法步驟1.SP三步法脫蠟→梯度水化→滅活內源性過氧化物酶→抗原修復→封閉→一抗孵育→二抗孵育→SP反應→DAB顯色→蘇木素復染→常規脫水→透明→封片2、免疫組化的關鍵環節①脫蠟和水化②抗原修復③滅活內源性過氧化物酶和...

查看更多