培養基制備的注意事項

培養基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養物質和環境條件。培養基的質量直接關系到檢驗結果的準確性和可靠性，因此對于微生物檢驗而言，培養基的質量控制尤為重要。那么你知道培養基制備的注意事項有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、配置要求正確地制備培養基是進行微生物檢驗的基礎。當實驗人員使用商業化脫水合成培養基來配制培養基時，應嚴格按照產品說明進行配制，并做好配制記錄。在配制過程中，實驗人員需要遵守相關操作標準，戴上口罩以防吸入含有有毒物質的培養基粉末。在稱量和溶解培養基時應使用專...

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蛋白表達的常見問題

蛋白表達實驗的時，有時候實驗會覺得參考實驗方法和克隆的蛋白基因序列完q沒有問題，但蛋白電泳就是沒有結果。那么你知道蛋白表達的常見問題有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！1、載體構建錯誤，很多克隆新人常常弄錯讀碼框。比如Qiagen的pQE系列載體，其復制位點常有一兩個堿基的差異；另外有些酶產生粘端有些酶產生平端，這些都容易導致讀碼框錯誤，從而無法表達出來。2、宿主菌選擇不當。不同的宿主菌其基因型是不同的。有些經過特殊修飾的載體，或者特殊用途的載體，或者有特殊啟動子的載體，必須選擇適...

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PCR反應體系包括什么

PCR是一種選擇性體外快速擴增DNA片段的方法。在體外以類似于細胞內DNA的半保留復制過程，以擬擴增的模板DNA分子，與模板DNA互補的寡核苷酸引物、DNA聚合酶、4種dNTP及適合的緩沖體系組成的反應體系，經過重復地變性一退火一延伸三步，擴增新的目的DNA鏈，這個過程通過控制反應體系的溫度來實現。那么你知道PCR反應體系包括什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、模板(template)模板即擴增用的DNA，可以是任何來源DNA(如基因組DNA、質粒DNA等)或RNA(如總RNA、...

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為什么qPCR提RNA不提DNA

定量PCR（qPCR）是一種在PCR反應中實時監測核酸擴增產物的方法。為什么qPCR提RNA不提DNA？RNA更能反映gene的表達水平依據中心法則，細胞內的DNA序列首先被轉錄成RNA分子，特別是信使RNA（mRNA），隨后mRNA攜帶遺傳信息，用于指導蛋白質的合成。mRNA的豐度和多樣性是衡量基因表達水平的關鍵指標，它們直接關聯到特定基因在特定時間和條件下的活性。與蛋白質相比，RNA的水平變化能夠更快地反映基因表達的動態變化，因為RNA的穩定性相對較低，其水平變化可以迅速...

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RNA和WB蛋白的關系是怎樣的？

qRT-PCR（定量逆轉錄聚合酶鏈反應）和Westernblot（蛋白質印跡法）是兩種常用的生物分子檢測技術，它們分別用于檢測mRNA和蛋白質的表達水平。雖然蛋白質是由mRNA翻譯而來，但mRNA的表達水平總是與蛋白質的表達水平一致嗎？做實驗任何一個結果如果你驗證了幾遍都是一樣，那么請不要懷疑自己，也許不是你做錯了，試圖去解釋這種現象!蛋白表達和RNA水平不一致的原因有：轉錄后調控：mRNA在轉錄后可以經歷多種調控過程，如剪接、編輯、降解和穩定性調控。這些過程可以影響mRNA...

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