細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染的原理

哺乳動物細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染能在短期內(nèi)快速表達高活性蛋白而被廣泛應(yīng)用。那么細(xì)胞瞬時轉(zhuǎn)染的原理是什么？讓我們一起來看看吧！哺乳動物細(xì)胞自身具有蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，獲得的蛋白更具有天然活性。哺乳動物細(xì)胞生產(chǎn)蛋白的方式有兩種：瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時轉(zhuǎn)染的特點是短期快速表達，滿足蛋白的小量制備。而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系能夠滿足蛋白的大量、長期生產(chǎn)。瞬時轉(zhuǎn)染的原理是指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。隨著細(xì)胞的生長分裂，...

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ELISA主要材料試劑有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。那么ELISA主要材料試劑有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、抗原和抗體在ELISA實施過程中，抗原和抗體的質(zhì)量決定實驗是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價高、親和力強。ELISA所用抗原有三個來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動物...

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ELISA的常見問題有哪些？解決方法是什么？

酶聯(lián)免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。那么你知道ELISA的常見問題有哪些？解決方法是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、高背景或陰性對照只偏高原因：1.陰性對照孔被陽性對照貨樣品污染2.抗體非特異性結(jié)合3.酶結(jié)合物過濃4.孵育溫度過高解決方法：1.洗滌是，勿將洗液溢出孔外2.封閉液不合適，更換封閉液3.請...

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PCR引物設(shè)計的關(guān)鍵點有哪些？

PCR引物是人工合成的一段寡聚核苷酸。引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，因此，PCR的首要任務(wù)就是引物設(shè)計。那么你知道PCR引物設(shè)計的關(guān)鍵點有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計DNA序列的保守區(qū)是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因，通過序列分析軟件（比如DNAman）比對（Alignment），各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。二、引物長度一般在15~30堿基之間引物長度（primerlength）常用的是18-...

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瓊脂糖核酸電泳，選擇紫外還是藍光？

DNA分子是一種自身不會發(fā)出熒光的大分子，需要相應(yīng)的核酸分子染料結(jié)合到DNA分子的大溝處，通過激發(fā)光激發(fā)DNA–核酸染料復(fù)合物，復(fù)合物會發(fā)出一束強熒光，通過相應(yīng)的濾光片過濾得到單波長的發(fā)射光，通過照相機或者肉眼捕獲就能夠檢測到相應(yīng)的DNA分子。那么瓊脂糖核酸電泳要選擇紫外還是藍光呢？讓我們一起來看看吧！從核酸電泳發(fā)展至今，絕大多數(shù)的分子生物學(xué)實驗室選擇溴化乙錠（EtBr，也簡稱EB）作為核酸分子染料，由于EB的光譜特性，又不得不選擇紫外光作為激發(fā)光。EB分子因其分子量較小，容...

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